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近日，寿仙谷植物药研究院与浙江大学药物信息学研究所在SCI期刊《FrontierinPharmacology》联合发表了一篇名为《ScreeningImmunoactiveCompoundsofGanodermalucidumSporesbyMassSpectrometryMolecularNetworkingCombinedWithinvivoZebrafishAssays（通过质谱分子网络与斑马鱼药效学实验发现灵芝孢子粉中的免疫活性成分）》的研究论文，为灵芝孢子粉增强免疫提供了新的论据。目的：

研究去壁灵芝孢子粉的增强免疫作用。

方法：首先采用高分辨质谱和分子网络技术对灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉和去壁灵芝孢子粉的化学成分进行分析，共推断鉴定了个成分。在此基础上，采用斑马鱼模型复制中性粒细胞及巨噬细胞减少症，系统评价灵芝孢子粉的免疫活性。结论：

1、去壁灵芝孢子粉可显著促进中性粒细胞和巨噬细胞的生成，并增强巨噬细胞的吞噬功能。

2、发现20-hydroxylganodericacidG、elfvingicacidA、ganohainanicacidC等为潜在的免疫活性成分。

内容

本实验流程如图1。

①通过UPLC-MS/MS获得灵芝孢子粉的化学信息，并用质谱分子网络对数据进行快速解析；

②通过中性粒细胞或巨噬细胞缺陷斑马鱼模型，以中性粒细胞数量、巨噬细胞数量及巨噬细胞吞噬活性三个方面来评价其免疫调节活性；

③根据灵芝孢子粉样品中各成分的峰面积及相应的药效，通过偏最小二乘回归（PLSR）算法计算各成分的免疫活性并排序，筛选出潜在的免疫活性成分。

图1实验流程图

灵芝孢子粉（GLS）、破壁灵芝孢子粉（BGLS）和去壁灵芝孢子粉（RGLS）典型色谱图如图2A所示。基于分子网络技术（图2B）分别从灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉和去壁灵芝孢子粉中鉴定出20、96、个成分。结果表明，以峰面积为指标，去壁灵芝孢子粉有效成分的含量比破壁灵芝孢子粉提高了2-16倍。这说明去壁工艺可以富集灵芝孢子粉的有效成分，显著提高其含量。

图2灵芝孢子粉（GLS）、破壁灵芝孢子粉（BGLS）和去壁灵芝孢子粉（RGLS）典型色谱图（A）；基于分子网络的灵芝三萜类成分快速解析（B）

静脉注射Vinorelbine构建斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞缺陷模型。不同浓度的破壁和去壁灵芝孢子粉作用后，斑马鱼中性粒细胞数量有不同程度的恢复，其中33μg/mL的去壁孢子粉可以极显著促进中性粒细胞的生成数量（P0.01），效果也优于破壁孢子粉；高浓度的去壁灵芝孢子粉（、μg/mL）可显著促进巨噬细胞的形成，并增强其吞噬功能（P0.01或0.），而破壁孢子粉的作用没有显著性。这说明去壁灵芝孢子粉的作用要优于破壁灵芝孢子粉（图3）。

图3破壁、去壁灵芝孢子粉对中性粒细胞及巨噬细胞减少症的药效作用

以上结果提示灵芝孢子粉的免疫调节活性与有效成分三萜含量呈正相关。本研究使用偏最小二乘回归（PLSR）来寻找化学成分（X变量）和活性（Y变量，即中性粒细胞回收率、巨噬细胞形成效率、巨噬细胞吞噬效率）之间的相关性。如图4所示，20-hydroxylganodericacidG、elfvingicacidA、elfvingicC、lucidenicacidI、ganohainanicacidC等11个成分得分较高，可能为潜在的免疫活性成分，应进一步采用体内和体外实验进行活性验证和机制研究。

图4基于偏最小二乘回归（PLSR）的灵芝孢子粉免疫活性成分分析

结论：

1、去壁灵芝孢子粉可显著促进中性粒细胞和巨噬细胞的生成，并增强巨噬细胞的吞噬功能。2、发现20-hydroxylganodericacidG、elfvingicacidA、ganohainanicacidC等多个潜在的免疫活性成分。3、去壁灵芝孢子粉的作用要优于破壁灵芝孢子粉。预览时标签不可点