北京中科白癜风医院热心公益 https://m-mip.39.net/news/mipso_6169066.html灵芝化学成分与质量控制方法的研究综述
陈若芸
（中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室，北京）
本文综述灵芝活性成分和质量控制方法的研究进展。灵芝化学成分有三萜类化合物，核苷类化合物，呋喃类衍生物，甾醇类化合物，生物碱类化合物，氢醌及其他类化合物，脑苷及多肽、氨基酸类化合物，多糖、糖肽类化合物，以及有机酸、长链烷烃类化合物。其已有的质量控制方法研究包括比色方法测定灵芝总三萜酸含量，HPLC方法测定灵芝三萜酸，灵芝HPLC指纹图谱研究，高效毛细管电泳法测定核苷类化学成分的含量，灵芝中甾醇类化合物分析，灵芝孢子油中脂肪酸含量测定等。
关键词灵芝；三萜化合物；甾醇；质量控制；指纹图谱
（接上期）
2质量控制方法研究2.1比色方法测定灵芝总三萜酸李保明等建立了测定灵芝总三萜酸含量的比色方法[10]。灵芝子实体、灵芝孢子粉用无水乙醇回流提取，提取液经过碱化、酸化后，用氯仿萃取，萃取液经无水硫酸钠干燥后减压蒸干，制成无水乙醇溶液，与硫酸加热产生颜色反应，测定其吸光度值。对照品和样品溶液在nm处有最大吸收值，故选择测定波长为nm。此法准确，重现性好，样品背景干扰小，适用于灵芝子实体和灵芝孢子粉中总三萜酸的含量测定。
对照品溶液的制备。精密称取灵芝酸B对照品约5mg，置于5mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得含灵芝酸B约1mg/mL的对照品溶液。测定结果见表1。
2.2HPLC方法测定灵芝三萜酸
马林等建立了测定灵芝4种三萜酸的HPLC方法[11]。李保明等[12]建立了9种灵芝三萜酸HPLC含量测定方法，并测定了31种在不同产地、用不同培养基栽培的赤芝子实体中的9种三萜酸含量。此方法快速，重现性好，可作为评价灵芝质量的方法。
9种灵芝三萜酸对照品均由中国医学科学院药物研究所实验室研制提供，经IR、UV、NMR、MS等光谱鉴定，其HPLC分析纯度在98%以上；赤芝（G.lucidum）药材的来源及测定结果见表2。2.3灵芝HPLC指纹图谱研究
李保明等[13]采用高效液相色谱法对灵芝的指纹图谱进行了研究，利用Agilent系统高效液相色谱仪（美国）、紫外检测器（DAD）检测，色谱柱为AlltechC18（mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.04%甲酸梯度洗脱，0～10min时，乙腈0%～20%，10～20min时，乙腈20%～25%，20～50min时，乙腈25%～30%，50～65min时，乙腈30%～38%；流速为1.0mL/min；检测波长为nm，柱温15℃。
15个灵芝三萜对照品均由中国医学科学院药物研究所实验室研制提供，经IR、UV、NMR、MS等光谱鉴定，HPLC分析纯度为98%以上；分析了18个批次的灵芝子实体（样品来源见表3），并建立了指纹图谱，确定了19个共有峰，包括灵芝酸I（1）、灵芝酸C2（2）、赤芝酸LM1（4）、灵芝酸G（5）、灵芝烯酸B（6）、灵芝酸B（7）、灵芝烯酸A（9）、灵芝酸A（11）、12-乙酰基-3-羟基-7,11,15,23-四羰基-羊毛甾-8-烯-26-酸（12）、灵芝酸D（13）、赤芝酸A（14）、灵芝烯酸D（15）、灵芝酸C（16）、灵芝酸E（17）、灵芝孢子酸A（19）等15个已知化合物峰，以及4个未知化合物峰，其中有13批灵芝样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上。
本试验分别测定了赤芝（G.lucidum，包括野生和人工栽培）、松杉灵芝（G.tsugae）、鹿角灵芝（G.amboinense）、紫芝（G.sinense）、硬孔灵芝（G.duropora）等样品，结果显示，紫芝和硬孔灵芝在本实验条件下，没有色谱峰出现；赤芝（栽培）的指纹图谱相似度大于0.92，两个（野生）赤芝分别为0.和0.；两个鹿角灵芝分别为0.和0.；而松杉灵芝则为0.86。从赤芝的指纹图谱和相似度结果看出，它们的共有峰均为19个，相似度虽有差异，但所含成分基本一致（图1）。在灵芝分类学上，赤芝和松杉灵芝同为灵芝属灵芝组真菌，而紫芝和硬孔灵芝则属于紫芝组，从三萜化合物存在的情况看，两者也有明显的区别，可为灵芝的化学分类提供参考。
本方法简单、准确、重复性好，为灵芝的质量控制标准提供了有效的方法。
2.4高效毛细管电泳法测定核苷类化学成分
戴敬、鲁静[14]等建立了高效毛细管电泳测定灵芝培养液中核苷类化学成分的方法，测定了其中两种核苷-腺苷和鸟苷的含量。方法为：使用熔融石英毛细管柱，75midX57cm（有效长度50cm），缓冲体系20mmol/L硼砂含30mmol/L十二烷基硫酸钠，添加5%乙醇（95%），pH10.0（1mmol/LNAOH调节）；气动进样时间15s；分离电压10kV（恒压方式）；柱温20℃；检测波长nm。回归方程，腺苷：Y=0.+0.X（r=0.）；鸟苷：Y=0.+0.X（r=0.）。平均回收率（n=5）：腺苷为99.22%，RSD=3.66%；鸟苷为.3%，RSD=1.91%。内标为：磺胺甲唑。样品的前处理使用AB-8大孔树脂吸附，30%乙醇洗脱。根据建立的方法，测定了9批灵芝培养液样品中腺苷和鸟苷的含量，结果腺苷的含量在19.3～23.6g/mL之间，鸟苷的含量在12.5～19.8g/mL之间。
2.5灵芝中甾醇类化合物分析
王江[15]等用气相色谱测定了鹿角状灵芝和片状灵芝的甾醇含量。灵芝中的甾醇用氯仿提取后，加吡啶和醋酐进行酰化处理，进样分析，以保留时间定性，以峰高定量。仪器为日本岛津GC-9A型气相色谱仪、FID检测器、C-RSA型数据处理机。色谱条件：玻璃柱2mX3mm，填料2.0%SE-30＋1.5%QF-1/chromosorbWAW（60～80目）单体。柱温℃，检测器温℃，气化室温℃，载气NmL/min，H20.10MPa，Air0.07MPa。以菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇为标准品绘制工作曲线，其中鹿角状灵芝甾醇总量为0.79mg/g；片状灵芝的甾醇总量为1.04mg/g。
2.6灵芝孢子油中脂肪酸含量测定
陈体强等[16]采用气相色谱与质谱（GC－MS）进行联用分析，从超临界CO2萃取孢子油中鉴定出18种脂肪酸成分，包括6种不饱和脂肪酸、7种饱和脂肪酸、2种环链脂肪酸，以及己酸、辛酸、壬酸等短链脂肪酸。GC定量分析结果表明：灵芝孢子油中检出9种已知脂肪酸，不饱和脂肪酸总量为73.6％；其中，主体成分油酸（C18:1）、亚油酸（C18:2）和棕榈酸（C16:0）等含量分别为57.5％、13.4％、19.6％；此外，不饱和脂肪酸十六碳烯酸（C16:1）和亚麻酸（C18:3）等的含量分别为2.2％和0.5％。
参考文献
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[10]李保明,刘超,王洪庆,等.灵芝总三萜酸含量测定方法的研究[J].中国中药杂志,,32(12):-.
[11]马林,吴丰,陈若芸.灵芝三萜成分分析[J].药学学报,,38(1):50-52.
[12]李保明,古海峰,陈若芸,等.HPLC测定不同产地灵芝中9种三萜酸[J].中国中药杂志,,37(23):-.
[13]李保明,刘超,王洪庆,等.赤芝中三萜酸HPLC特征图谱的研究[J].药物分析杂志,,29(9):-.
[14]戴敬,鲁静,林瑞超,等.高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中核苷类成分的含量[J].中国中药杂志,,27(9):
-.
[15]王江,吴荣,王辛.GC-测定灵芝中甾醇的含量[J].中国卫生检验杂志,,14(2):-.
[16]陈体强,吴锦忠,徐洁,等.灵芝孢子油脂肪酸组分的分析[J].菌物研究,,3(2):35-38.
原文发表于：食药用菌,,():P.-.
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